体内药理学检测|BioMice百奥动物

实验原理：首先组织切片（FFPE）经过适当的预处理，然后使用ACD专利的特异性寡核苷酸探针与靶标RNA 进行杂交。RNAscope® 2.5 HD 可见光双染检测采用两种独立的信号放大系统，每个信号放大系统均采用不同的酶与底物的反应进行显色。两个靶基因的 RNA 转录本显示为两个不同颜色的点状或信号簇状，在明场显微镜 40- 100 倍放大下可见。

肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）分析

流式细胞术

常见同源肿瘤模型TILs分析概览

4-1BB抗体肿瘤药效评价中的免疫相关分析

4-1BB人源化小鼠B-h4-1BB小鼠，MC38皮下瘤，腹腔给药Urelumab。对肿瘤组织进行免疫分析：

给药两次过后，各类免疫细胞亚群变化不明显；

给药四次后，Urelumab analogue能引起肿瘤浸润免疫细胞的增加，CD8+的T细胞增加，和Treg细胞的减少，使得肿瘤免疫微环境往激活杀伤肿瘤的方向发展。

组织原位多色免疫荧光

实验原理：以荧光物质标记抗体/抗原而进行抗原/抗体定位的技术

实验流程：石蜡切片——脱蜡至水——抗原修复——封闭——直标抗体染色/一抗染色——DAPI染核/二抗染色——HRP/荧光染色——DAPI染色——封片观察

实验通量：24张/次

实验组织：免疫器官（脾脏、淋巴结、骨髓等）、肠、肿瘤等

共染：8色（含DAPI）,4色（含DAPI）

肿瘤微环境评价-TILs

IHC

RNA Scope

实验原理：首先组织切片（FFPE）经过适当的预处理，然后使用ACD专利的特异性寡核苷酸探针与靶标RNA 进行杂交。RNAscope^® 2.5 HD 可见光双染检测采用两种独立的信号放大系统，每个信号放大系统均采用不同的酶与底物的反应进行显色。两个靶基因的 RNA 转录本显示为两个不同颜色的点状或信号簇状，在明场显微镜 40- 100 倍放大下可见

细胞因子分析

细胞因子是由多种细胞产生的一组低分子量可溶性蛋白。它们包括白介素，干扰素，趋化因子，肿瘤坏死因子等，在调节人体的免疫反应中起重要作用。

ELISA

实验原理：抗原抗体结合形成固相免疫复合物，通过加入的酶标抗体和底物显色反应的程度进行抗原/抗体的定性或定量分析。
实验方法：双抗体夹心法（检测抗原的常用方法）：固相载体上包被特异性抗体，检测受检样品中的抗原；

细胞因子微球检测技术（Cytometric bead array, CBA）

细胞因子微球检测技术（Cytometric Bead Array，CBA），是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,该技术整合了免疫微球、激光检测、信号处理及计算机运算等功能，能够对样本中的多个指标进行定性、定量检测。相较于ELISA，检测样本需求更少，更有效的捕获被分析物，检测更快速、准确。

案例：B-hCD40小鼠的细胞因子分析

细胞因子是由多种细胞产生的一组低分子量可溶性蛋白。它们包括白介素，干扰素，趋化因子，肿瘤坏死因子等，在调节人体的免疫反应中起重要作用。 CD40是主要在抗原呈递细胞（APC）中表达的共刺激受体，其与T细胞上表达的配体CD154（CD40L）结合或与激动性抗CD40抗体结合会导致APC和T细胞的活化，并产生多种细胞因子。百奥赛图自主开发了B-hCD40小鼠（鼠CD40胞外域被人CD40胞外域取代），并利用抗人CD40抗体selicrelumab在小鼠MC38肿瘤模型中进行了体内药效研究验证。用其他抗人CD40抗体治疗的MC38 / B-hCD40模型中的多细胞因子分析结果表明，这些抗体的细胞因子表达也不同。细胞因子介导的毒性是基于CD40治疗药物开发中重要的临床安全考虑因素之一，因此，细胞因子表达分析有助于选择具有细胞因子介导的毒性降低的有效抗人CD40抗体。

注射两种不同的CD40抗体的CD40人源化小鼠血清中的13个细胞因子的变化情况，发现不同的抗体作用后，小鼠细胞因子分泌增加或减少的相应情况不同。

Luminex多功能流式点阵仪平台

基于Luminex^®平台的xMAP技术，以更少量的样本完成对更多生物标志物的分析。能检测细胞因子、趋化因子、生长因子、代谢和内分泌相关指标、神经科学类、抗体亚型鉴别、肿瘤和信号通路相关分子等。可以实现同时对多达500种因子进行检测与定量。该技术在多通道“类ELISA”分析中，为每种靶标使用了经不同染色处理的捕获微球。相比传统的液相样本中相应指标的定量检测技术（如传统ELISA），该技术的最大优势为可实现同时在单个样本中定量、定性检测多达几十、上百种指标分子。