实验动物：C57BL/6，7周龄，雌性

造模试剂：OXA（恶唑酮）

造模方法：致敏—Day0涂抹右耳+背部

                激发—Day7~Day25涂抹右耳+背部

模型评价内容

• 小鼠体重
• 背部及耳部表皮厚度测量
• 血清中总IgE检测
• 病理分析：皮肤炎症等病变，嗜酸性粒细胞等

采用OXA诱导野生型C57BL/6小鼠AD模型。(A)小鼠体重。(B)耳厚。(C)血清总IgE浓度。OXA组小鼠耳厚度和血清IgE水平明显升高。值表示为平均值±SEM。**<0.01。

野生型C57BL/6 AD模型的耳皮肤病理和淋巴细胞浸润分析(A)小鼠耳组织切片苏木素-伊红(H&E)染色;(B)耳表皮内嗜酸性粒细胞浸润评分。值表示为平均值±SEM。****<0.0001。

治疗策略

可以选择在免疫接种时开始治疗-预防性策略，也可以在小鼠发病后开始治疗-治疗性策略。

AD小鼠疾病模型（C57BL/6）用于评价Dexamethasone药效

• 从B图可以看出，Oxa造模组的耳部厚度有明显的增加，同时血清中总的IgE（图C）有明显的升高，证明造模成功。
• 从耳部厚度和IgE变化情况可以看出，不同浓度的Dexamethasone对AD疾病具有不同程度的缓解作用。
• 高剂量组（0.09%DPD）对耳部皮肤水肿的缓解作用达到了与对照组持平的效果。但与对照组相比，也会导致明显的体重减轻。

在野生型C57BL/6 AD模型中验证地塞米松（Dex）的疗效。（D）小鼠耳组织切片的苏木精和伊红（H&E）染色。（E）耳表皮嗜酸性粒细胞浸润评分。数值表示为平均值±SEM。***p<0.001，***p<0.0001。

病理分析

组别设置

从病理统计结果发现，除对照组外，其余四组动物背部和耳朵皮肤表皮均可见不同程度的基质细胞增生、表皮增厚、角化过度伴角化不全、表皮痂皮，真皮及皮下组织可见混合炎细胞浸润等特异性皮炎相关的病理性改变，提示G2造模组和G3-G5给药组的模型动物均造模成功。对各组动物的背部皮肤和耳朵皮肤嗜酸性粒细胞浸润改变进行了病理学评分和统计。受试品组G3-G5背部和耳朵皮肤嗜酸粒细胞浸润均低于G2造模组。其中，背部皮肤中，受试品G3-G5组嗜酸粒细胞浸润程度未见显著差异。耳朵皮肤中，受试品G4、G5组嗜酸粒细胞浸润程度要低于G2和G3组。上述结果提示三组浓度的受试品均对特异性皮炎相关症状有一定改善作用，其中浓度为0.06%和0.09%的DPD药效较好。

在AD模型(B-hIL4/hIL4RA小鼠)中的药效验证(内部合成)

Dupilumab减轻了OXA诱导的B-hIL4/IL4RA小鼠特应性皮炎。小鼠在第0天在耳朵和皮肤上涂抹0.8%的OXA，然后在第7 ~ 25天每周涂抹3次0.4%的OXA。应用OXA后记录大鼠体质量和耳厚度。小鼠从第6天开始接受PBS或dupilumab(10、25 mg/kg)每周2次，共6次。Dupilumab对体重(C)没有影响。Dupilumab治疗的小鼠耳厚度(B)和血清IgE (D)降低。

抗人IL4R抗体对B-hIL4/hIL4R小鼠的药效。抗人IL-4R抗体(内部合成)在恶唑酮诱导的B-hIL4R小鼠皮肤病变中的剂量依赖性效应。

Dupilumab降低OXA诱导的人IL-4增加B-hIL4/hIL4RA小鼠(Elisa)

ELISA分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中蛋白质表达。分别于第9、16、23、26天收集建模区耳部和皮肤样本，进行ELISA分析。组织样本匀浆上清进行ELISA检测，结果以相应样本的总蛋白浓度进行标准化。

Luminex分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型的蛋白表达

Luminex分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型的蛋白质表达。分别在第9、16、23、26天收集建模区域的耳和皮肤样本，通过Luminex软件进行分析。组织样本匀浆上清液进行检测。

MSD在OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中的蛋白表达分析分别在第9、16、23、26天收集建模区域的耳和皮肤样本，通过Luminex软件进行分析。组织样本匀浆上清液进行检测。

通过qRT-PCR分析oxa诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中小鼠IL-5和IL-13的表达。分别于第9天和第26天收集耳标本，提取总RNA。然后逆转录RNA样本，通过qRT-PCR检测小鼠IL-5、IL-13水平，同时以小鼠GAPDH作为管家基因。