Pharmacokinetics(药物代谢动力学)是定量药理学中重要的一门学科,主要研究药物在体内的吸收、分布、代谢、清除等特性,为药物筛选、药效毒理实验剂量设计、临床实验设计等提供支持。百奥赛图药理药效体外检测部PK检测专注于抗体类药物的药代动力学检测和分析,主要技术平台为ELISA和ECL (电化学发光)和定量药理专业建模分析软件Winnolin。我们可以提供满足FDA指导原则要求的定量检测方法开发和验证,针对单抗、双抗等进行高效稳定的血药浓度检测,以及初步的药代参数分析,为候选分子评价、药效实验设计和临床转化研究提供支持。
人源(化)单克隆抗体小鼠血药浓度分析
药物浓度检测是药代动力学研究的重要指标,开发可以准确稳定地检测血液样本中药物浓度的检测方法非常重要,目前应用最为广泛的抗体药物浓度检测方法是ELISA法,通过使用不同种类的ELISA方法可以对单抗,双抗浓度进行分析。
基于双抗体夹心法,使用抗人的抗体对血清中的人源化抗体进行捕获,再加入标记有HRP的可特异性结合人源化抗体的Fcγ fragment的抗体作为检测抗体,检测血清中药物浓度
特点:
基于双抗夹心法ELISA的药物浓度检测方法,可以检测IgG1,IgG2,IgG4亚型的单克隆抗体和具有完整抗体结构的融合蛋白和双特异性抗体。
有固定的实验条件,可以快速进行样本检测,可支持方法学验证。
主要检测血清中人源化抗体的总量,包括已经和可溶性靶点结合的抗体。
非特异性结合抗体药物,不能在联合给药情况下分析目标抗体浓度。
本方法仅限于检测非人动物样本中的药物浓度检测。
根据药物靶点开发方法,捕获试剂为人源化抗体的靶蛋白,可以特异性与抗体的CDR区结合。再加入标记有HRP的可特异性结合人源化抗体的Fcγ fragment的抗体作为检测抗体,检测血清中药物浓度
特点:
根据抗体靶点开发的特异性检测方法,针对受试品具有高度特异性,可以在联合用药情况下检测目标抗体。
一般根据需求开发方法或进行方法转移,可支持方法学验证。
严格意义上讲,此类方法主要检测血清中游离的人源化抗体量,无法检测已经与靶点结合的抗体。
人双特异性抗体小鼠血药浓度分析
根据药物靶点开发方法,用于检测血清中具有完整结构的双特异性抗体,捕获试剂为人源化抗体的靶蛋白,可以特异性与抗体的CDR区结合,加入双特异性抗体另一特异性靶点蛋白(带有Biotin或His标记)完成整个检测体系的建立。加入Streptavidin-HRP或Anti-His Antibody-HRP产生检测信号
特点:
根据抗体靶点开发的特异性检测方法,针对受试品具有高度特异性,可以检测血清中具有完整结构的双抗,可以用于临床前申报方法。
几乎所有生物制剂都可能诱发一定程度的抗药性抗体(anti-drug antibody,ADA),抗药抗体反应可能会降低药物疗效,引起各种临床的不良反应。抗体药物可以特异性捕获ADA,通过加入的检测抗体为带有HRP 的Goat Anti-Mouse的二抗(IgG),可特异性结合鼠体内抗体的Fc fragment,即可检测到小鼠体内产生的抗药抗体。
特点:
目前行业内常用的抗药抗体检测方法,能够检测血清中游离的抗药抗体。
能够对抗药抗体进行定性检测,也可根据信号值做出初步定量判断。
案例:人源化抗CTLA4单克隆抗体的PK研究
工作流程
MC38荷瘤B-hCTLA4小鼠中进行抗人CTLA4抗体的PK分析。抗人CTLA4抗体分别以0.1、0.3、1.3 mg/kg剂量静脉注射。采用ELISA (A)测定血浆抗体浓度,采用Phoenix Winnolin 8.0建立非房室模型计算PK参数。AUC0-∞表现为剂量线性相关性(B),而半衰期(T1/2)在各给药剂量下均无变化。