图1.通过流式细胞术进行靶点结合亲和力验证。与MCF-7、A431或SNU-5细胞系相比,Disitamab Vedotin(RC-48)和Trastuzumab对BT-474和NCI-N87细胞具有更高的结合亲和力。
A:抗体内吞检测示意图。将NCI-N87、MCF-7和BT-474细胞与pH敏感染料标记的Disitamab Vedotin(RC-48)或Trastuzumab孵育24小时,并用IncuCyte连续观察。 B-C:纵坐标表示细胞内抗体的信号强度;D:Disitamab Vedotin(RC-48)和Trastuzumab都以时间依赖的方式被内吞到NCI-N87和BT-474细胞中,而在MCF-7细胞中没有。
体外细胞增殖和凋亡实验评估Payload效应。A-B:NCI-N87/MCF-7细胞用不同浓度的Trastuzumab,Enhertu,和Disitamab Vedotin (RC-48)刺激。Enhertu和RC-48以浓度依赖的方式显著抑制NCI-N87细胞的增殖,而Trastuzumab没有明显的抑制效应。此外,它们都不能抑制MCF-7细胞的增殖。C-D:用不同浓度的Trastuzumab或RC-48处理BT-474或MCF-7细胞72小时。RC-48(中剂量或高剂量)显著促进BT-474细胞凋亡。
Disitamab vedotin (RC-48)在体外的旁观者杀伤效应。
将MDA-MB-468细胞(HER2阴性)和BT-474(HER2阳性)以不同比例(分别为0:1、1:0、1:1)共培养过夜。用Disitamab vedotin (RC-48)或Vehicle处理5天后,RC-48对BT-474细胞显示出明显的抑制作用(A),而对MDA-MB-468细胞几乎没有细胞毒性(B)。MDA-MB-468细胞与HER2阳性细胞(C-D)共培养时, Disitamab vedotin (RC-48)对其具有明显的杀伤作用。
ADCs药物在体内CDX模型中的药效评价