百奥动物药理药效部病理平台可提供不同组织部位及多种靶点的HE、IHC染色技术，助力不同种属、不同疾病模型的组织病理学分析。下边将为大家介绍HE及IHC切片质量检查要点。

HE切片质量检查

苏木精（Hematoxylin）-伊红（Eosin）染色，简称HE染色，是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。染色结果细胞核呈蓝色，细胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色，钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。

HE染色应着色鲜艳，红、蓝分明，对比清晰。制片完成后实验人员应将切片与相应的病理制片记录单认真核对，确认无误后在镜下进行切片质量检查，检查要点如表1：

HE染色：A为小鼠肝组织，可见肝实质和门管区▲小叶间静脉、★小叶间胆管、→小叶间动脉。B为小鼠肌肉组织，可见明显炎细胞浸润及钙化灶（→所示蓝紫色钙化灶）。

表1. 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准

注：切片质量分级标准：①甲级：≥90分（优）；②乙级片：≥75~89分（良）；③丙级：60~74分（基本合格）；④丁级：≤59分（不合格）^[1]

IHC切片质量检查

免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)根据标记物的不同，可分为不同的方法，例如免疫荧光组织化学方法、免疫酶组织化学方法和免疫金组织化学技术等。不同的免疫组织化学技术各具有独特的试剂和方法，但其基本技术方法是相似的，都包括抗体和组织材料的准备、免疫组化染色前的处理、免疫染色、显色剂的选择、染色对照的设计、结果的观察和分析等。

理想的IHC染色切片除了要满足基本的无刀痕、无褶皱、组织完整等要求，还应该满足结果特异性好、定位准确、阳性反应与阴性背景对比清晰、细胞结构显示良好等。然而由于免疫组化染色过程中涉及许多环节，多种因素可影响染色结果，最终可能出现非正常的假阴性或假阳性现象，干扰对染色结果的判断。

A.大鼠：T淋巴细胞绕中央动脉形成淋巴鞘，B淋巴细胞位于边缘区和淋巴小结；

B.大鼠：T淋巴细胞CD3免疫组化染色（蓝），B淋巴细胞CD20免疫组化染色（黄）。^[2]

IHC染色后的切片质量控制聚焦在结果的判读，目前病理诊断中应用的IHC抗体种类繁多，对于不同的抗体，其IHC染色结果的判读标准可能存在差异，因此，判读IHC结果时首先应当掌握该指标的判读标准。

IHC染色：A为小鼠卵巢组织，细胞结构显示良好，核染清晰，可见位于透明带的棕褐色染色的ZP2阳性信号。B为小鼠脾脏，细胞结构显示良好，核染清晰，可见棕褐色染色的CD4+T淋巴细胞。

免疫组织化学结果的判断原则

1、必须设染色对照

每批染色都要以特异性的阳性对照和阴性对照为基础，才能对染色结果做出正确的判断。没有阳性对照，也就不能做出真正阴性结果的判断；同理，没有阴性对照，也就不能做出真正阳性结果的判断。因而，没有对照的免疫组化染色,即使做出了判断也是不可信的。

2、抗原表达必须在特定部位

阳性表达必须在细胞和组织特定的抗原部位才能视为阳性。如角蛋白（Keratin）在细胞质内，细胞核增殖抗原（PCNA）在胞核内，上皮细胞膜抗原（EMA）和白细胞共同抗原（LCA）在细胞膜上。不在抗原所在部位的阳性表达一概不能视为确切的阳性结果，而只能视作为阳性着色。难以确定或存在争议的阳性分布必须经由对照染色结果加以证实。

3、阴性结果不能视为抗原不表达

遇到阴性结果不能不加分析地武断认为具有否定意义。阳性表达有强弱、多少之分，哪怕是只有少数细胞阳性（但只要出现在抗原所在部位）也要视为阳性表达，不能认为个别细胞阳性而不作阳性看待。

4、尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达

特别是酶免疫标记检测，由于内源酶的干扰，出血坏死区常呈现弥漫性成片着色，属非抗原定位反应，判断时应加以除外。切痕和组织片周边界面也常常呈现非特异阳性着色，这是由于界面不平整，标记试剂残留干扰所致，也非真实抗原阳性标记。

5、对免疫组化标记结果的意义不能绝对化

当免疫组化诊断结果与HE切片诊断不一致时，应再结合临床资料、X射线等影像学及实验室结果综合分析，并复核免疫组化切片及HE切片，审慎判断观察结果，不宜用免疫组化检查结果简单否定HE切片病理组织学诊断。^[3]

参考资料：

[1]：中华医学会，临床技术操作规范 病理学分册[M]. 北京：人民军医出版社，2015：6.

[2]：李宪堂，K. Nasir Khan, John E. Burkhardt, 实验动物功能性组织学图谱[M]. 北京：科学出版社，2019：93.

[3]：倪灿荣，马大烈，戴益民，免疫组织化学实验技术及应用【M】，北京，化学工业出版社，2006：128.