肿瘤免疫治疗的新型“助燃剂”

Toll样受体家族（TLRs）是一类模式识别受体，可以识别PAMPs（病原体相关分子模式，Pathogen-associated molecular pattern），引发人体复杂的级联免疫反应；不但表达于免疫细胞上，还在各种肿瘤细胞中表达，参与肿瘤免疫监视，同时在炎症、免疫细胞调控、和增殖方面也发挥着关键作用。人和小鼠共13种TLRs，其中TLR10为人独有，TLR11/12/13为小鼠独有，TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR6是位于细胞表面的受体，相反TLR3、TLR7、TLR 8、TLR9位于内涵体中。

图1 TRLs受体及其配体^[1]

相较于其它TLRs成员，TLR8 在多种免疫细胞表达，可以激活髓样树突状细胞来逆转Treg 细胞的免疫抑制功能，从而抑制肿瘤[2]。TLR7和TLR8信号通路共有接头蛋白MyD88，TLR7激活后通过形成复合物MyD88-IRF7促进炎症细胞因子表达[3]。当TLR8与其配体包括GU-rich ssRNA，short dsRNA，寡核苷酸和多种合成的化学激动剂结合时，其空间构象发生改变，形成同源二聚体，通过下游MyD88/IRAKs激活IRF7及NF-κB通路，诱导多种炎性细胞因子、IFNs、趋化因子的产生，抵抗细菌和病毒感染，也参与到多种疾病发生发展过程中[4]；另外TLR8还可以通过激活IRF3/7通路诱导IFN-b表达。

图2 TLR8信号通路^[4]

TLR8药物靶点布局

目前，全球尚未有TLR8 激动剂获批上市，但已出现多款在研药物。药物类型上，TLR8激动剂包括小分子化药和抗体偶联药物；适应症方面，在研TLR8激动剂还被开发用于治疗晚期实体瘤和慢性乙型肝炎。在这个领域研究进度比较领先的公司是吉利德，其中GS-9688是一款可口服使用的选择性TLR8小分子激动剂，用于治疗慢性乙型肝炎。另外上海迪诺医药科技有限公司的DN1508052-01是国内首款获批临床的小分子TLR8激动剂，用于治疗标准治疗后疾病进展或无标准治疗的晚期实体肿瘤。

表1. 部分药物研究进展

数据来源于科睿唯安及公开信息整理

TLR8 作为一种已被证实的肿瘤靶点，具有广阔的肿瘤治疗临床应用潜力。BioMice百奥动物开发了一种新型TLR8人源化小鼠模型，助力相关药物的临床前药效评估，为TLR8激动剂的安全性评价提供了有力工具。部分数据展示如下：

B-hTLR8 mice

基本信息

DC细胞中TLR8蛋白表达分析

采集野生和纯合B-hTLR8 (H/H)小鼠的脾细胞，用种属特异性抗TLR8抗体进行流式细胞术分析。由于抗小鼠TLR8抗体与人TLR8的交叉反应，在野生小鼠和纯合B-hTLR8中检测到小鼠TLR8。人TLR8仅能在纯合B-hTLR8中检测到，而不能在野生小鼠中检测到。

采集野生型小鼠和纯合B-hTLR8 (H/H)小鼠脾细胞，用TLR8激动剂TLR8-506和GS-9688 (Selgantolimod)刺激，ELISA对小鼠TNFα、IFNγ和IL12p40进行检测。与野生型相比，纯合B-hTLR8小鼠的TNFα、IFNγ和IL12p40分泌增加，这是由于B-hTLR8 mice与人TLR8有选择性的高亲和力结合，并且刺激与GS-9688浓度呈剂量依赖性。

脾脏中白细胞亚群分析

用流式细胞术分析从雌性C57BL/6和B-hTLR8小鼠(n= 3,6周龄)中分离的脾细胞以评估白细胞亚群。A.具有代表性的FACS图。B. FACS分析结果。纯合B- hTLR8小鼠的T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞、粒细胞、单核细胞和巨噬细胞的百分比与C57BL/6小鼠相似，表明TLR8人源化不会改变这些细胞类型在脾脏的整体发育、分化或分布。

药效实验

靶向TROP2的抗体偶联TLR8小分子激动剂药物抗肿瘤药效。(A)抗人TROP2抗体偶联TLR8小分子激动剂抑制B-hTLR8小鼠MC38肿瘤生长。小鼠结肠癌B-hTROP2 MC38细胞皮下接种到纯合B-hTLR8小鼠(雌性，9周龄，n=8)。小鼠按体重差异分组，分别用不同剂量的抗体偶联药物治疗。(B)治疗期间体重变化。如图A所示，抗人TROP2抗体偶联TLR8激动剂对B-hTLR8小鼠肿瘤生长的控制有效，表明B-hTLR8小鼠模型是临床前体内研究中评估抗体偶联TLR8激动剂的理想模型。

TLR8靶向药物在B-hTLR8胶原诱导的关节炎模型中的体内疗效。96只动物按体重随机分为2组，A组8只，B组88只。第0天，A组皮下注射PBS；B组动物注射CⅡ型乳剂。当B组动物的平均临床评分大于0时，再次分组，将这些动物分为5组，每组8只，分别标记为G2~G6。G1组为为非CIA对照组。G2为载体组（模型组），G3为80mg/kg阳性对照药物组，G4为低剂量TLR8靶向药物组，G5为中剂量TLR8靶向药物，G6为高剂量TLR8靶向药物。

(A) 重量变化。与第0天相比，每天动物体重变化的百分比；(B) 给药后第21天的动物临床评分。作为供试品组，观察到G3-G6的平均得分低于载体治疗组（G2）。特别是G3和G6与G2表现出显著差异；(C) H&E染色病理统计评分。镜下G1组未见病变。G2组观察到不同程度的皮下混合性炎症细胞浸润、关节滑膜炎和/或滑膜形成、踝关节和/或指关节软骨和骨组织破坏。G6组显示TLR8靶向药物高剂量对关节炎动物模型相关病变有一定改善作用。

表2. TLRs靶点人源化小鼠列表

本期分享到此结束，如果您对相关小鼠模型有需求，欢迎随时与我们联系。数据多多，欢迎分享~

参考文献

[1]Taro Kawai, Shizuo Akira. TLR signaling .Cell Death and Differentiation (2006) 13, 816–825

[2]Martínez-Espinoza, Iván, and Antonieta Guerrero-Plata. “The Relevance of TLR8 in Viral Infections.”Pathogens (Basel, Switzerland) vol. 11,2 134. 22 Jan. 2022

[3]Wang, J. et al. The Functional Effects of Physical Interactions among Toll-like Receptors 7, 8, and 9. Journal of Biological Chemistry 281, 37427-37434 (2006).

[4]Dowling, D.J. Recent Advances in the Discovery and Delivery of TLR7/8 Agonists as Vaccine Adjuvants. (2018).