人免疫系统重建小鼠肿瘤模型可同时具备人免疫系统和人肿瘤组织，实现了在动物体内模拟人类免疫系统和肿瘤之间的相互作用，是评估抗肿瘤药物免疫治疗效果的重要临床前动物模型。我们已成功建立了包括PBMC重建、CD34+造血干细胞重建以及NK细胞重建的人免疫系统重建小鼠模型。

药效实验中，相比于传统的肿瘤异种移植模型，免疫重建肿瘤模型需要考虑到更多的实验条件。本篇文章以重度免疫缺陷小鼠B-NDG为例，为大家介绍免疫重建模型的制备、如何检测肿瘤生长和测量肿瘤大小、怎样进行小鼠的分组及给药等。

图1 传统肿瘤异种移植模型与免疫重建小鼠肿瘤模型流程图^[1]

实验用小鼠周龄

● 在PBMC重建模型中，我们常用6周龄的B-NDG小鼠，根据前期筛选后的实验数据（参看：PBMC重建不稳定，三招教你搞定）调整PBMC注射和肿瘤细胞接种时间，通常是先注射PBMC再接种肿瘤细胞；当肿瘤细胞生长至分组时所需肿瘤体积时间长于PBMC重建时间，会先接种肿瘤细胞再注射PBMC。

●在CD34+造血干细胞重建模型中，为节省细胞注射量以及减小开展实验时小鼠周龄，我们推荐使用B-NDG新生鼠，出生后24 h-72 h内完成辐照以及CD34+造血干细胞的注射，待免疫重建成功后再接种肿瘤细胞。

图2 小鼠出生后生理变化^[2]

检测肿瘤生长和测量肿瘤体积

重建后，皮下接种肿瘤细胞（实体瘤），每天观察小鼠状态并确认是否成瘤，肉眼观察肿瘤的长短径及走向。如果肿瘤不明显时可用手触摸判断，然后用酒精棉球擦拭肿瘤部位皮肤，去除角质使其轮廓清晰，如果动物毛发过长，应剔除肿瘤组织部位毛发，方便测量。

测量前，先判断肿瘤的长短径，确保测量时长短径处于垂直方向；如需高度测量，一并判断其高度。肿瘤体积的计算通常采用如下公式：

①长短径肿瘤体积测量：肿瘤体积（mm³）= 0.5 × 长径×短径2；

②长宽高肿瘤体积测量：肿瘤体积（mm³）=长×宽×高×0.5236（使用相对较少，依具体实验需求而定）。

图3 肿瘤体积的测量

分组与给药

B-NDG小鼠免疫重建中，对于PBMC重建，建议分组当天hCD45+%≥10%；对于CD34+造血干细胞重建，建议分组当天hCD45+%≥25%。分组时，通常选取肿瘤体积约100±50 mm3且免疫重建成功的小鼠入组。

给药方式通常采用腹腔注射，分组当天开始给药，给药频率通常参考受试品的PK数据，给药体系则根据受试品的不同特性来最终确定。此外，通过文献调研确定具体的给药剂量及给药时间，通常给药时间从开始到结束共持续三周。

综上，实验中免疫重建hCD45+比例、肿瘤体积、给药剂量等均可能会根据每个实验的具体需求做出调整，例如不同donor重建比例有高有低，不同细胞系对不同donor敏感性的差异，不同肿瘤成瘤生长速度不同，都会对实验造成影响，建议在正式实验前进行预实验摸索好实验条件后再进行正式实验，避免浪费珍贵的实验动物和受试品药物。

参考文献

[1]. Olson B, Li Y, Lin Y, et al. Mouse Models for Cancer Immunotherapy Research. Cancer Discov. 2018, Nov;8(11):1358-1365.

[2]. Dutta, Sulagna, and Pallav Sengupta. “Men and mice: Relating their ages.” Life sciences vol. 152 (2016): 244-8. doi:10.1016/j.lfs.2015.10.025