PBMC重建是目前常见的免疫重建方式，可以较快的在免疫缺陷鼠中将人的T细胞重建，相对于CD34+造血干细胞重建模型，实验周期更短，可用于多种模型开发或药效评价，如GvHD模型、过继性细胞治疗、溶瘤病毒以及免疫检查点药物特别是T细胞相关药物的药效评价。但在实际实验中，变量较多，实验重复性较差，如何在不确定因素中建立相对稳定的实验条件是PBMC重建的关键因素。

百奥赛图通过PBMC的donor筛选、细胞系敏感性和接种时间筛选，尽量减少实验中的变量，力求提高实验稳定性，在不确定性中寻找确定性，可为您提供全套的PBMC重建实验方案。

图1 PBMC重建和药效流程图

招式一：Donor筛选

不同donor对NDG小鼠上的攻击性有较大差别，如下图所示，3个donor重建后观察体重、体重变化、GvHD评分和生存曲线，可以看到不同donor的反应差别很大，反应太严重的无法满足我们实验的时间窗口，我们选择那些GvHD评分评分适中，体重下降不明显的建立自己的donor库，再进行后续的其他筛选实验。

图 2 用不同donor免疫重建对NDG小鼠的影响

在筛选到稳定来源donor后，就可以进行CDX或PDX的成瘤，不同细胞系或肿瘤块在不同PBMC上的敏感性不同，此处以细胞系举例说明其筛选过程。

招式二：不敏感细胞系筛选

因为不同donor在不同细胞系上的敏感性不同，因此在我们选定donor后就需要对细胞系进行成瘤，筛选出那些可以在对应donor上长起来的细胞系，根本原因是不同来源的PBMC和细胞系HLA分型不同，导致PBMC本身对细胞系有一定的杀伤，不同donor对同一个细胞系反应会有不同，同一个donor对不同细胞系的反应也可能不同。

例如，我们选用不同的donor在Raji和A375细胞系上进行成瘤，使用不同donor重建后移植同样数量的A375细胞系，有的细胞可长起来，有的就长不起来，因此，针对donor 1，我们可以进行后续的A375的药效实验，donor 2则无法进行此类实验，只能使用其他细胞系进行药效验证。

图3 不同Donor在A375细胞系的敏感性不同

招式三：接种时间的选择

一般来说，在PBMC重建进行药效试验分组时会有2个分组标准：CD45的比例和肿瘤体积，经查阅大量文献，当CD45比例达到10%左右，实体瘤肿瘤细胞系达到100±50mm3时，2个标准同时达到后我们才会进行分组给药，为了使两个时间点正好能够重合，我们需要摸索PBMC和细胞系的接种时间，一般而言会固定PBMC接种时间后再接种细胞系，百奥赛图根据前面确定的donor和细胞系，已经摸索了近20种细胞系接种时间，可以直接拿来进行后续的药效筛选。

通过这三招筛选，百奥赛图已经建立了自己的donor库和成瘤细胞系库，并且摸索出了不同细胞系的接种时间，同时我们也在不断筛选新的donor，扩大自己的库存，以满足后续大量的药效筛选需求。

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参考文献：

1. Guil-Luna, S., Sedlik, C. & Piaggio, E. Humanized Mouse Models to Evaluate Cancer Immunotherapeutics. Annual Review of Cancer Biology 5, 119-136 (2021).

2. De La Rochere, P., et al. Humanized Mice for the Study of Immuno-Oncology. Trends in immunology 39, 748-763 (2018).

3. Varadé, J., Magadán, S. & González-Fernández, Á. Human immunology and immunotherapy: main achievements and challenges. Cellular & molecular immunology 18, 805-828 (2021).

撰稿：赵可